其作用原理基于:如果在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中,形成了含dU碱基的PCR扩增产物,该酶能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键,降解该PCR扩增产物。规格1U/μl储存缓冲液20mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,1mMDTT,0.05% Tween20,50% glycerol,pH8.0。
试剂组成:
1、UNG 1U/μl
2、10×Reaction Buffer:200mM Tris-HCl(pH8.0,25℃),100mM NaCl,10mM EDTA,1mg/ml BSA。活性定义37℃条件下,1小时降解1μg含dU碱基的单链DNA的酶量为1单位。保存条件每天或每周使用保存于-20℃。长期储存可保存于-70℃,但必须严格避免-70℃保存时的反复冻融。
质量控制:
1、SDS-PAGE电泳纯度大于98%;
2、降解活性、批间差异、稳定性;
3、1UUNG在37℃处理3分钟后,103拷贝以下含U模版应完全降解,不能产生扩增产物;
4、无外源核酸酶活性,无外源内切、外切核酸酶污染。
![](file://C:\Users\SUDA服务器\Documents\Tencent Files\2896400477\Image\C2C\W4{VHCVF4X2IK%SN0K[8XDU.png)
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1、Incubate the product for 2 min at 50℃;
2、Inactivate UNG by heating to 95℃ for 5 min.
注意事项:
1、避免多次冻融,切勿暴露在温度波动较大之处。温度波动对产品的稳定性有极大影响。
2、UNG酶可以在PCR反应前清除不慎污染的含dUTP的PCR产物,从而避免由于污染导致的假阳性结果;
3、由于不同待扩增基因对dUTP的利用效率和对UNG酶的敏感度不同,因此,如果采用UNG体系导致检测灵敏度下降,应对反应体系进行调整优化;
4、扩增前后要使用专用的区域和移液器,戴手套操作并经常更换,PCR反应完成后切勿打开反应管。以最大限度的减少PCR产物对样品的污染。