| 货号 | 969261 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 简介 | 中等规模自动化纯化His-tagged蛋白 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 描述 | Performance 根据客户对大量自动纯化蛋白质的需求，QIAGEN调整了Ni-NTA Superflow 96 BioRobot的实验方案，以处理更大的培养体积，每孔可纯化毫克级的His-tagged蛋白。每孔Ni-NTA Superflow树脂的量增加到200 µl，优化的裂解缓冲液配方能够处理至多25 ml（天然条件下纯化）或者15 ml（变性条件下纯化）培养液（高产的实验方案）。细胞培养液转移到24孔板中处理。每孔可纯化多达10 mg的His-tagged蛋白（取决于蛋白表达水平）（参见"Milligram amounts of His-tagged proteins per well"），同一批次的蛋白质可用于多次检测，减少制备蛋白的次数（参见"Automated expression clone screening"）。一步法纯化提供了高产量的高纯度蛋白质，并且可实现大蛋白复合物纯化。
Principle QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System，包括Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit，原理是基于著名专利技术Ni-NTA（镍-次氮基三乙酸）树脂，用于纯化带有6个或者以上组氨酸残基His标签的蛋白质。该技术能够在天然或者变性的条件下，从各种表达体系中一步法纯化大多数His-tagged蛋白。NTA有4个镍离子的螯合位，相比金属-螯合纯化系统只有3个与金属离子相互作用的位点，能够更紧密地与镍结合。额外的螯合位点防止镍离子浸出，从而拥有更强的结合能力，并且相比于其他金属-螯合纯化系统，该系统能制备更高纯度的蛋白质。QIAexpress体系可以从任何的表达体系中，包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌，纯化His-tagged蛋白。（参见"Protein purification with the Ni-NTA protein purification system"）。 Procedure Ni-NTA Superflow BioRobot Kit的纯化过程包括4个步骤：细胞裂解、蛋白结合、洗涤和洗脱（参见"Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit"）。利用QIAexpress 系统纯化重组蛋白并不取决于蛋白或者6xHis标签的三维空间结构。这一特性能够在天然或变性条件下，一步从稀释溶液或者粗裂解物中纯化蛋白。强变性剂和清洁剂可以有效的溶解和纯化受体、膜蛋白和形成包涵体蛋白。这些试剂能够高效地去除非特异性结合的污染物，可以包含在洗涤缓冲液中（参见下表）。在温和的条件下，加入100–250 mM咪唑作为竞争物或者降低pH值洗脱纯化的蛋白质。Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit需配合BioRobot 3000、8000或者9600工作站使用。
Applications QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System可有效的一步纯化蛋白质，纯化的蛋白适用于各种应用，包括：
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| 说明书 |
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| 供应商 | Qiagen |