| 货号 | 31314 | |||||||||||||||
| 简介 | 快速、小规模纯化His-tagged蛋白，同时提供离心柱、试剂、缓冲液和对照质粒 | |||||||||||||||
| 描述 | Performance Ni-NTA Spin Kit是快速、高效纯化蛋白质的理想试剂（参见Purification at different expression levels），同时也呈现了高度的可重复性（参见Reproducible automated purification）。Principle QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System，包括Ni-NTA Spin Columns，原理是基于著名专利技术Ni-NTA（镍-次氮基三乙酸）树脂，用于纯化带有6个或者以上组氨酸残基His标签的蛋白质。该技术能够在天然或者变性的条件下，从任何表达体系中，一步法纯化大多数His-tagged蛋白。NTA有4个镍离子的螯合位，相比金属-螯合纯化系统只有3个与金属离子相互作用的位点，能够更紧密地与镍结合。额外的螯合位点防止镍离子脱落，从而拥有更强的结合能力，并且相比于其他金属-螯合纯化系统，该系统能制备更高纯度的蛋白质。QIAexpress体系可以从任何的表达体系中，包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌，纯化His-tagged蛋白。 Procedure 纯化His-tagged蛋白包括4个步骤：细胞裂解、蛋白结合、洗涤和洗脱（参见"Ni-NTA Spin Column purification with the Ni-NTA"）。利用QIAexpress系统纯化重组蛋白并不取决于蛋白质或者His标签的三维空间结构。这一特性能够在天然或变性条件下，一步从稀释溶液或者粗裂解物中纯化蛋白。多至600 μl细胞裂解物可加注到Ni-NTA离心柱上。标签蛋白在2分钟快速离心结合到Ni-NTA硅胶基质上，无标签蛋白则流过基质。在洗涤步骤后，纯化的蛋白质在温和条件下洗脱（如pH降至5.9，或者加入100–500 mM咪唑）至100–300 μl体积。因为His标签较小，几乎不产生免疫原，通常无需去除。纯化的蛋白可以立即使用。蛋白质可以从多个小规模的表达培养物中纯化得到，只需约30分钟或者60分钟（自动化的QIAcube全自动核酸纯化仪操作流程）。强变性剂和清洁剂可以有效地溶解和纯化受体、膜蛋白和形成包涵体蛋白质。这些试剂能够高效地去除非特异性结合的污染物，可以包含在洗涤缓冲液中（参见下表）。在温和的条件下，加入100–250 mM咪唑作为竞争物或者降低pH值洗脱纯化的蛋白质。
Applications QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System提供可靠的一步法纯化蛋白质，适用于各种应用，包括：
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| 说明书 |
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| 供应商 | Qiagen |