| 货号 | 37101 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 简介 | 亲和层析方法纯化磷酸化蛋白 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 描述 | Performance PhosphoProtein Purification Kit可高特异性分离磷酸化蛋白，并且完全分离磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白（参见Highly specific separation of phosphorylated proteins"和"SDS-PAGE analysis of flow-through and eluate fractions"）。PhosphoProtein Purification Kit也适用于蛋白质组的分析（参见"Efficient enrichment for 2D-PAGE phosphoproteome analysis"）。Principle PhosphoProtein Purification Kit基于亲和层析法，将细胞裂解液中的磷酸化和非磷酸化蛋白完全分离，由此便于研究整个细胞和特定蛋白的磷酸化状态。使用高特异性小鼠单克隆抗体PhosphoThreonine和PhosphoSerine Western印迹之后鉴定磷酸化蛋白，这两种抗体可辨别由磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸残基组成的表位，而与周围的氨基酸无关（参见"Complete separation of unphosphorylated and phosphorylated proteins"）。 Procedure 每个PhosphoProtein Purification Column可从107个真核细胞中纯化磷酸化蛋白（相当于2.5 mg总蛋白）。细胞溶解于裂解缓冲液中，其中去污剂和核酸酶用于分解蛋白混合物，蛋白酶抑制剂用于防止蛋白降解。将澄清的裂解液上样到 PhosphoProtein Purification Column，裂解液中的磷酸化蛋白结合到柱子上，非磷酸化蛋白则流过柱子。洗涤之后，从柱子上洗脱磷酸化蛋白（参见"Phosphoprotein purification procedure"）。通常，总蛋白的10%为磷酸化蛋白（取决于细胞类型和状态）。两种蛋白都保持生物活性，在有需要的情况下可进一步纯化。PhosphoProtein Purification Kit中提供Nanosep Ultrafiltration Columns，确保蛋白的高效浓缩和脱盐。表格中为应用PhosphoProtein Purification Kit进行分离时，每种蛋白的常规产量。
Applications PhosphoProtein Purification Kit可完全分离磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白，分离后的磷酸化蛋白适用于以下研究：
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| 说明书 |
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| 供应商 | Qiagen |