| 货号 | 231224 | ||||||||||||||||||||||||||
| 简介 | 直接克隆PCR产物 | ||||||||||||||||||||||||||
| 描述 | Performance QIAGEN PCR CloningplusKit整合了最新的具有省时特点的连接技术，可对Taq和其他非高保真DNA聚合酶产生的PCR产物进行快速、简单、高效的克隆。QIAGEN PCR CloningplusKit优于其他供应商的试剂盒，确保结果成功。与基于TA的克隆载体相比，使用pDrive Cloning Vector克隆更加快速（参见"Highly specific cloning with a shorter ligation time of 30 min"、"Highly specific cloning with a ligation time of 4 h"和表格）。QIAGEN PCR Cloningplus Kit提供QIAGEN EZ Competent Cells，无需费时的复苏过程即可高效转化（每微克DNA >108个菌落形成单位（CFU）；参见"Transformation without recovery incubation"）。
Principle pDrive Cloning Vector（参见"pDrive Cloning Vector"）通过UA杂交可对PCR产物进行高效克隆。载体是3端带有U突出末端的线性形式，能与Taq和其他非高保真DNA聚合酶产生的带有A突出末端的PCR产物进行高特异性杂交。pDrive Cloning Vector具有很多有用的特征，便于对克隆的PCR产物进行分析。这些特征包括多种独特的限制性酶切识别位点、通用测序引物位点和用于体外转录的启动子。此外，载体还可进行氨苄青霉素和卡那霉素筛选，以及对重组克隆的蓝/白斑筛选。 PCR产物可高效克隆到pDrive Cloning Vector，与基于TA的克隆载体相比，所需时间更少。而且，T是最可能与非互补碱基（如G、C和T）杂交的碱基，带有T突出末端的载体更可能发生自连或连接克隆引物或退火引物，导致假阳性克隆数目增加。相比起来，pDrive Cloning Vector具有更高克隆效率，表明U对非特异性碱基配对有更低容忍度。 Ligation Master Mix采用预混形式，专用于为高效克隆提供最佳的杂交环境。 使用QIAGEN EZ Competent Cells能让克隆步骤更加快速和方便。转化的细胞通常都需要在SOC培养基中孵育复苏，需要时间来表达抗性。与此不同，QIAGEN EZ Competent Cells不需要这个耗时的复苏孵育步骤即可高效转化（每微克DNA >108个菌落形成单位（CFU）。
Procedure 直接将PCR产物和pDrive Cloning Vector及Ligation Master Mix简单混合，再将连接反应液加入到感受态细胞中进行转化。QIAGEN EZ Competent Cells在转化后无需在SOC培养基复苏孵育，可直接在琼脂/氨苄青霉素培养基上涂板。与拓扑异构酶法、TA法、常规粘性末端和平末端克隆方法相比，QIAGEN PCR Cloningplus Kit（参见"PCR Cloning Kit procedure"）操作流程更加快速。连接需要30分钟，使用QIAGEN EZ Competent Cells进行转化和涂板只需10分钟，从PCR产物到涂板的整个操作流程只需40分钟。 Applications QIAGEN PCR CloningplusKit适用于克隆任何3端带有单独A突出末端的PCR产物。使用Taq和其他非高保真DNA聚合酶产生的PCR产物无需任何制备，可直接进行克隆。提供高保真DNA聚合酶的试剂盒，如HotStar HiFidelity Polymerase Kit和QIAGEN LongRange PCR Kit，可产生带有A突出末端的PCR产物，非常适合与QIAGEN PCR CloningplusKit配合使用。 |
| 说明书 |
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| 供应商 | Qiagen |