| 货号 | 220211 | |||||||||||||||||||||
| 简介 | 适用于快速一步法RT-PCR，灵敏度高、特异性强、保真性出色 | |||||||||||||||||||||
| 描述 | Performance QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit可对任意RNA模板进行便利、高灵敏度、特异性的RT-PCR。该试剂盒含有经优化的组分，使得逆转录和PCR扩增可在同一混合液中“一步”完成。独特的酶配比和专门的反应缓冲液确保了高效、特异性的逆转录反应和PCR反应在同一反应管中有序进行，无需额外的优化步骤（参见图示Superior sensitivity以及Superior specificity）。在逆转录步骤，Omniscript和Sensiscript逆转录酶上结合有逆转录阻断基团，使其处于非激活状态，不会在室温条件下生成非特异的转录产物。当温度升高至50°C时，阻断基团从逆转录酶上解离，逆转录酶迅速达到完全激活状态。 PCR扩增步骤受三种经平衡配比的DNA聚合酶催化。在室温下，QuantiNova DNA Polymerase处于抗体介导的阻断酶活状态。它在95ºC孵育5分钟后即可恢复活性，在第一个热循环即可实现高度特异性的扩增。HotStarTaq DNA Polymerase的酶活性逐渐提高，确保PCR的高产量。具有校对功能的高保真DNA聚合酶具有3→5外切酶活性，同样是95ºC孵育5分钟活化，确保扩增的高度准确性和持续合成能力。预混液中含有新型双阳离子PCR buffer，确保在宽泛的退火温度范围内，都可生成高特异性PCR产物。RT-PCR反应还采用了Q-Solution，这一组分有助于对于富含GC或含有复杂二级结构的模板进行高效的逆转录和扩增（参见图示Amplification of GC‐rich amplicons）。 室温下进行反应体系构建这一特点，使该试剂盒可便利的用于自动化体系构建流程中。PCR预混液含有反应所需缓冲液、dNTP和DNA聚合酶,而含有逆转录酶和RNase抑制剂的RT-Mix则单独包装，确保逆转录反应不会提前进行。在进行反应体系构建时，仅需将引物、模板RNA和RT-Mix加入预混液中。 该试剂盒中含有加样指示剂，能有效防止移液错误的发生，确保结果的可靠。显色体系由预混液指示剂和模板指示剂两部分组成，通过颜色变化即可轻松判断反应体系中是否加入模板，减少反应构建时的失误（参见图示Optional pipetting control）。该试剂盒还经专门优化，可适用于双重PCR，能够在单一反应体系中同时扩增阳性内质控。试剂盒中含有的RNase抑制剂能够防止因RNase污染而导致的RNA降解。 Principle QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit适用于对各种RNA模板进行灵敏、便利的一步法RT-PCR。酶混合液经过特别配比，适用用于逆转录和PCR扩增反应。Omniscript和Sensiscript逆转录酶对RNA模板具有高亲和性，即便对于低至1 pg的RNA也能进行高效、灵敏的逆转录。逆转录反应结束后，95°C孵育5分钟，激活DNA聚合酶，同时逆转录酶失活。这一热启动步骤能够避免产生引物二聚体等非特异性扩增产物，并且减少背景条带弥散的发生，确保高度灵敏性、可重复的RT-PCR反应。引物最佳退火温度取决于其碱基组成、引物浓度和离子反应环境。QIAGEN PCR Buffers含有K+和NH4+，确保在宽泛的退火温度范围内，均可生成特异性PCR产物（参见图示NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing）。在此条件下非特异性结合的引物二聚体无法稳定存在，因此可确保反应的特异性。由于反应对于温度条件的要求降低，减少了繁琐的温度优化过程。与此相反，在使用仅含有K+的的PCR或一步法RT-PCR缓冲液时，理想的PCR退火温度范围较小，并且难以预测。QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Buffer经特别设计，能够用于高效的逆转录和PCR扩增反应。缓冲液中含有的新型添加物组分能够防止逆转录酶对于PCR扩增反应的抑制，解决了这一在一步法RT-PCR经常面临的问题。这一特制的缓冲液确保引物能够在宽泛的温度和Mg2+浓度范围内实现与模板的特异性结合，进而确保对各种RNA模板进行灵敏、高效的RT-PCR反应。 QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit中含有特殊的Q-Solution组分，它能够对于核酸的熔解行为进行修饰，促进富含GC或二级结构的困难模板的逆转录和扩增。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有进行RT-PCR的全部所需试剂，适用于即便是最敏感的应用（参见下表）。
Procedure QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit能够进行便利、快速的RT-PCR反应，适用于多种应用，包括病毒检测、分子诊断研究、以及基因表达分析。只需将逆转录酶混合液、引物和模板加入到预混液中，即可开始热循环。反应体系构建可以在室温条件下进行，可选择性加入预混液和模板变色指示剂，以避免在移液过程中可能发生的错误。反应混合液中含有逆转录和PCR扩增反应所需的全部试剂。Applications QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit适用于以下RT-PCR应用：
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| 说明书 | ||
| 供应商 | Qiagen |