快速、高特异性扩增，适合多种应用

Performance

每一批HotStarTaqPlus Master Mix Kit都经过全方位的质量控制测试，包括：严格的PCR特异性和具有可重复性的试剂，即使低拷贝的靶分子也可扩增。通过检测，HotStarTaq DNA Polymerase可确保高度特异性和在热启动PCR中的卓越表现（参见"Highest specificity"和"Higher specificity with different primer–template systems"和表格）。该试剂盒提供的新型PCR缓冲液使得在多种PCR条件下都维持高特异性，无需优化。该试剂盒提供的CoralLoad Concentrate，提高移液的可见性，并可直接将PCR产物上样至凝胶，提高便利性。CoralLoad Concentrate可以添加到PCR反应物中，不会影响扩增的灵敏度和特异性。已经证实，在含有CoralLoad Concentrate的情况下可顺利扩增PCR片段，用于克隆和限制性酶切，无需预先纯化。

高度特异性配合简单的操作使HotStarTaqPlusMaster Mix Kit适用于复杂的基因组或cDNA模板（参见"Effect of hot start on RT-PCR performance"）、多重引物对（参见"Specific amplification in multiplex PCR"）、从珍贵样本或低拷贝靶分子中抽提的模板（参见"Highly sensitive single-cell PCR"）。该试剂盒还适用于大量样本的扩增，诸如基因筛查等项目。

HotStarTaqPlus DNA Polymerase特性

浓度：5 units/µl
重组酶：是
底物类似物：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、fluorescent-dNTP/ddNTP
延伸速度：72°C条件下2–4 kb/min
酶半衰期：97°C条件下10 min，94°C条件下60 min
扩增效率：≥10⁵倍
5–>3外切酶活性：是
额外添加A：是
3–>5 外切酶活性：否
核酸酶污染：否
蛋白酶污染：否
RNases污染：否
自启活性：否  

Principle

HotStarTaqPlus Master Mix是一种即用型预混液，包含HotStarTaq DNA Polymerase、QIAGEN PCR Buffer、MgCl₂和dNTPs。HotStarTaqPlus DNA Polymerase，具备同HotStarTaq DNA Polymerase一样的卓越表现，激活时间只需5分钟。

HotStarTaqPlusDNA Polymerase是一种经修饰的QIAGEN Taq DNA Polymerase，以非活性形式提供，常温下没有聚合酶活性。避免PCR构建和循环初始阶段低温条件下非特异性引物的延伸和引物二聚体的形成（参见"Highest specificity"和"Higher specificity with different primer-template systems"）。95°C条件下孵育5分钟即可激活HotStarTaq Plus DNA Polymerase，这个步骤可整合入已有的热循环程序中。

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer通过提高每个PCR扩增退火过程特异性引物的结合比例，确保PCR每个循环特异性扩增（参见"Increased specificity of primer annealing"）。独特的KCl和(NH₄)₂SO₄平衡组合，使得该缓冲液与传统的PCR缓冲液相比在很宽的温度和Mg²⁺浓度范围内都有严格的引物退火条件和高度的特异性，无需进行耗时的优化。

CoralLoad PCR Buffer

HotStarTaqPlusDNA Polymerase同时提供CoralLoad PCR Buffer，CoralLoad PCR Buffer具备QIAGEN PCR Buffer的所有优点，同时可直接将PCR产物上样到琼脂凝胶上，无需加入凝胶上样缓冲液。CoralLoad PCR Buffer具备同样高的PCR特异性，与常规的QIAGEN PCR Buffer一样可减少优化过程。此外，它包含两种指示染料，橙色染料和红色染料，可方便的判断DNA的迁移距离和优化跑胶时间（参见"CoralLoad PCR Buffer"）。该缓冲液提高移液的可见性，并可直接将PCR产物上样至凝胶，提高便利性。

Procedure

HotStarTaqPlus Master Mix Kit以方便的预混液形式提供，易于使用。95°C条件下孵育5分钟即可激活HotStarTaq Plus DNA Polymerase，可以整合入已有的热循环程序。在室温下应用该预混液可快速、简单地构建反应体系，只需将10 µl HotStarTaq Plus Master Mix加入每个PCR反应管，并加入10 µl溶于该试剂盒提供的RNase-free蒸馏水的引物和模板DNA（参见"HotStarTaq Plus procedure"）。移液步骤最少化，降低操作误差和污染风险，确保提高通量和可重复性。该试剂盒提供高效、经优化的实验方案，用于快速、方便的PCR反应体系构建。同时试剂盒提供CoralLoad Concentrate，提高移液的可见性，并可直接将PCR产物上样至凝胶，提高便利性。

Applications

HotStarTaqPlus Master Mix Kit适合多种应用，包括各种富有挑战性的研究，如各种扩增应用：

• 复杂的基因模板
• 复杂的cDNA模板（如RT-PCR）
• 低拷贝的靶分子（如单细胞PCR）
• 多重引物对反应