使用miScript PCR System对miRNA进行基于SYBR^® Green法的real-time PCR分析

Performance

发现血清或血浆样本中的生物标记

以信号通路为主的miScript miRNA PCR Arrays的检测范围不断扩大，可发现生物过程中miRNAs的作用。使用QIAGEN专有的方法，可选择miScript miRNA PCR Arrays的量，确保芯片时时更新且与生物研究息息相关。目前miRNA研究领域突出的是血清或血浆样本中的miRNAs检测。近期发现血清和血浆中的胞外miRNAs相对稳定，研究集中在miRNA水平的变化，可作为一系列疾病研究的潜在非侵入性生物标记。设计Serum & Plasma miScript miRNA PCR Array，可快速分析84个与血清和血浆最具相关性的miRNAs（参见"Analysis of expression of circulating miRNAs in serum or plasma"）。

单个cDNA样本完成所有miRNomes分析

除了用于信号通路研究的miScript miRNA PCR Arrays，还有及时更新的miRNome miScript miRNA PCR Arrays用于包括人类、小鼠、大鼠和狗等多个物种。使用不到1 µg RNA即可快速分析人类的所有miRNome（参见"Whole miRNome profiling"）。miScript miRNA PCR Array中的每个引物都是经过实验验证的，确保使用real-time PCR高灵敏度、高特异性检测成熟miRNA。

Principle

miScript PCR System配合SYBR Green-based real-time PCR，高灵敏度、高特异性进行miRNA定量检测和分析。可以完成从RNA中合成cDNA及后续的real-time PCR检测miRNAs涉及的所有步骤。

使用miScript PCR System分析成熟miRNA，需要以下组件：

• miScript II RT Kit，可简单、单步合成cDNA。单个cDNA合成反应可用于检测数以百计的miRNAs。双缓冲体系满足使用real-time PCR进行miRNA定量的独特要求。
• miScript SYBR Green PCR Kit，包含QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和反向引物miScript Universal Primer，配合miScript Primer Assay或miScript miRNA PCR Array进行miRNAs检测。
• miScript miRNA PCR Array，前沿的miScript miRNA PCR Arrays包含成熟miRNA的特异性正向引物（miScript Primer Assays），用于miRNome平台及生物相关的、以信号通路为主的平台。

Procedure

使用miScript miRNA PCR Arrays进行miRNA表达分析简单、可靠。首先，使用miScript HiSpec Buffer配合miScript II RT Kit制备cDNA。然后，加入cDNA预混物、miScript Universal Primer、QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和不含RNase的纯水到miScript miRNA PCR Array。接着，运行real-time PCR循环仪，进行反应。最后，使用miScript miRNA PCR Array Data Analysis Tool分析数据。

miScript miRNA PCR Array板布局

miScript miRNA PCR Arrays适用于96孔板、384孔板或Rotor-Disc 100孔盘三种规格（参见"Pathway-Focused or miRNome miScript miRNA PCR Array layout for plate formats A, C, D, F"、"Pathway-Focused miScript miRNA PCR Array layout for plate formats E, G"、"384HC and miRNome miScript miRNA PCR Array layout for plate formats E, G"和"miScript miRNA PCR Array layout for Rotor-Disc format R"）。 每个芯片都包含几个对照检测，检测目的见表。

有关上述对照的更多信息，参见miScript miRNA PCR Array Handbook。

miScript miRNA QC PCR Array板布局

miScript miRNA QC PCR Arrays使用real-time PCR进行多个cDNA样本的质量评估。提供96孔板、384孔板或Rotor-Disc 100三种规格（如需更多信息，参见miScript miRNA PCR Array Handbook）。每个miScript miRNA QC PCR Array包含在miScript miRNA PCR Array上进行对照检测的副孔。96孔板和Rotor-Disc 100规格为至多8个cDNA样本提供质量对照。384孔板规格为至多32个cDNA样本提供质量对照。

miScript miRNA PCR Array Data Analysis Tool

在线提供关于miScript miRNA PCR Arrays的即用型数据分析软件，操作方便。每个miScript miRNA PCR Array带有一个专有的数据分析工具。一旦输入原始C_T值，该分析工具即可自动分析PCR对照，使用∆∆C_T方法进行相对定量。通过多种格式显示结果，可快速解读数据。

Applications

miScript miRNA PCR Arrays是miScript PCR System产品线的一部分，适用于：

• 分析疾病或信号通路相关的miRNA
• 全miRNA组分析
• 生物标记物发现