| 货号 | 218161 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 简介 | 使用miScript PCR System，对包含miRNA的总RNA进行逆转录 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 描述 | Performance miScript II RT Kit配合miScript PCR System的其他组分，灵敏和特异性地检测并定量miRNA。由于许多miRNA表达水平低，灵敏度特别重要，以确保数据的可靠。miScript PCR System灵敏度高、动态范围广和持续高扩增率。其卓越的性能使得初次尝试时即可获得高度重复性结果（参见"Reproducible results in technical and biological replicates"）。 高特异性miRNAs存在许多miRNA亚型家族，有些只是单个碱基的不同。这使得miRNA定量面临很大挑战。miScript PCR System可有效识别紧密相关的miRNA亚型，即使是只有单个碱基不同的miRNA也可（见表）。
Principle miScript PCR System应用SYBR Green-based real-time PCR，能够灵敏和特异性地进行miRNA的定量和谱分析。miScript PCR System可以完成从RNA中合成cDNA及后续的real-time PCR检测miRNAs涉及的所有步骤。 miScript II RT Kit双缓冲体系miScript II RT Kit包含miScript Reverse Transcriptase Mix、10x miScript Nucleics Mix、5x miScript HiSpec Buffer和5x miScript HiFlex Buffer。miScript Reverse Transcriptase Mix是一种经优化的poly(A)聚合酶和逆转录酶混合物。miScript Nucleics Mix包含dNTPs、rATP、oligo-dT引物和内部合成RNA对照（miRNA逆转录对照[miRTC]），可评估使用miScript miRNA PCR Arrays进行谱分析实验的逆转录性能（获取更多信息，请参考miScript miRNA PCR Array Handbook）。 miScript II RT Kit提供两种缓冲液：miScript HiSpec Buffer和miScript HiFlex Buffer，满足使用real-time PCR进行miRNA定量研究的特别要求（参见"miScript II RT Kit buffers"）。miScript HiSpec Buffer配合miScript miRNA PCR Arrays和miScript Primer Assays进行成熟miRNA谱分析和定量实验时，提供理想的结果。miScript HiFlex Buffer适合于低通量miRNA定量实验，从同一样本进行如miRNA、mRNA和前体miRNA等不同种类的RNA的定量实验除外。 miScript HiSpec Buffer进行逆转录实验使用miScript HiSpec Buffer进行逆转录反应，确保成熟miRNAs的选择性转化，miScript PCR Controls靶向转至cDNA。使用oligo-dT引物，成熟miRNAs通过poly(A)聚合酶加尾后，被逆转录至cDNA（参见"Selective conversion of mature miRNAs into cDNA in miScript HiSpec Buffer"）。加尾和逆转录在同一试管内同时进行。oligo-dT引物有一个3退化锚点和一个在5端的通用标签序列，可在real-time PCR步骤扩增成熟miRNA。miScript Primer Assays配合miScript SYBR Green PCR Kit，确保通过real-time PCR灵敏、特异性的定量miRNA。加尾和通用标签保证miScript Primer Assays不会检测到基因组DNA。 miScript HiFlex Buffer进行逆转录实验使用miScript HiFlex Buffer进行逆转录反应，可使所有种类的RNA转化至cDNA（参见"Simultaneous conversion of all RNA species into cDNA in miScript HiFlex Buffer"）。使用oligo-dT引物，成熟miRNAs通过poly(A) 聚合酶加尾后，被逆转录至cDNA。加尾和逆转录在同一试管内同时进行。oligo-dT引物有一个3退化锚点和一个在5端的通用标签序列，可在real-time PCR步骤扩增成熟miRNA。miScript Primer Assays配合miScript SYBR Green PCR Kit，确保通过real-time PCR定量miRNA。加尾和通用标签确保miScript Primer Assays不会检测到基因组DNA。其它种类RNA（包括miRNA前体、其它非编码RNA和mRNA）使用oligo-dT和随机引物转化至cDNA。配合miScript SYBR Green PCR Kit，使用合适的检测进行real-time PCR的RNAs检测（如用于非编码RNA检测的miScript Primer Assays 、用于miRNA前体检测的miScript Precursor Assays和用于mRNA检测的QuantiTect Primer Assays）。 Procedure 逆转录反应操作简单。包含miRNA的总RNA作为逆转录反应的起始材料。逆转录是一个简单的流程，包括在37oC条件下进行1个小时的孵育反应及在95oC条件下的简单孵育后进行的灭活反应。Applications miScript II RT Kit作为miScript PCR System的一部分，用于：
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| 说明书 |
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| 供应商 | Qiagen |