| 货号 | 205313 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 简介 | 快速合成cDNA，进行两步法real-time RT-PCR，用于基因表达分析 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 描述 | Performance 使用QuantiTect Reverse Transcription Kit，基因组DNA污染物可使用独特的gDNA Wipeout Buffer迅速有效的去除（参见"Effective genomic DNA removal for accurate real-time RT-PCR"）。去除基因组DNA对于准确的基因表达结果非常重要，而并不总是可以设计RNA特异性引物或探针。使用gDNA Wipeout Buffer可节省时间和费用，因为纯化RNA样品过程中或纯化后均无需另外采用DNase消化。 Quantiscript Reverse Transcriptase的高RNA亲和性配合Quantiscript RT Buffer可从各种RNA模板中获得高产量cDNA（见表“低丰度转录本可获得较高产量的cDNA”）。即使复杂的模板也能成功逆转录，如GC含量高或有复杂二级结构的模板。
RT Primer Mix包含有特别优化的oligo-dT和随机引物的混合物，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，甚至可从5区域开始（参见"Sensitive detection of a target at the 5 region of a 12.5 kb transcript"）。与其他供应商提供的试剂盒相比，QuantiTect Reverse Transcription Kit为real-time PCR分析提供高产量的cDNA，无需考虑待扩增目标序列位于转录本的哪个区域，检测低丰度的基因也具有更高灵敏度（参见"Higher sensitivity in real-time, two-step RT-PCR"）。同时，QuantiTect Reverse Transcription Kit也确保了real-time RT-PCR结果更好的重复性。 Principle QuantiTect Reverse Transcriptase是Omniscript和Sensiscript Reverse Transcriptases的新型混合物，对RNA具有高亲和性，可从各种含量的RNA（10 pg到1 µg）合成cDNA。与其他供应商提供的试剂盒相比，QuantiTect Reverse Transcription Kit为real-time PCR分析提供高产量的cDNA，无需考虑待扩增目标序列位于转录本的哪个区域。即使复杂的模板也能成功逆转录，如GC含量高或有复杂二级结构的模板。QuantiTect RT Buffer已经过优化，可与real-time PCR缓冲液兼容。 为获得准确的real-time RT-PCR基因表达分析结果，很重要的是仅扩增和检测cDNA。基因组DNA的干扰可通过设计横跨外显子/外显子边界的引物或探针避免。尽管如此，在某些特殊情况下（如：cDNA来自一个单外显子基因），起始RNA样品必须无基因组DNA。使用QuantiTect Reverse Transcription Kit，基因组DNA污染物可使用独特的gDNA Wipeout Buffer迅速有效的去除。使用gDNA Wipeout Buffer可节省时间和费用，因为纯化RNA样品过程中或纯化后均无需另外采用DNase消化。另外，不需要设计RNA特异性引物或探针。
Procedure 使用QuantiTect Reverse Transcription Kit可在20分钟内去除基因组DNA和合成cDNA（参见"Fast and convenient cDNA synthesis"）。由于两个反应均在同一孵育温度并使用预混液构建反应，因此操作过程快速且方便。 QuantiTect Reverse Transcription Kit包括快速合成cDNA所需的所有组分。纯化的RNA只需简单地与gDNA Wipeout Buffer孵育，即可有效去除污染的基因组DNA。与其他的方法相比，使用Quantiscript Reverse Transcriptase、Quantiscript RT Buffer和RT Primer Mix制备的预混液可将RNA样品直接进行逆转录。使用Quantiscript Reverse Transcriptase，即使具有复杂的二级结构的RNA也可在低温下转录，确保RNA保持完整：整个反应都在42°C下完成，并在95°C失活。不需要RNA变性、引物退火和RNase H消化。 Applications QuantiTect Reverse Transcription Kit可从各种类型的起始样本中合成cDNA，以实现高效和高灵敏度的real-time RT-PCR。样本类型包括激光显微切割样本和活组织切片。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 说明书 |
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| 供应商 | Qiagen |