| 货号 | 336313 |
| 简介 | 通过RNA干扰敲减人类、小鼠或大鼠的基因表达 |
| 描述 | Performance SureSilencing shRNA Plasmids通过RNA干扰，可对每个人类、小鼠或大鼠基因的表达进行特定的敲减。每个基因都设计了4个单独的shRNA，包装在一个质粒骨架上。 经实验验证的shRNA设计法则保证较好的基因特异性和RNAi效力。4个shRNA质粒中至少2个可对目的基因进行超过70%的敲减（通过real-time RT-PCR 检测转染细胞，细胞经基于GFP表达的FACS富集或抗生素抗性筛选）（参见"Knockdown of gene expression by at least 70%"）。2个有效的序列对照可用于检测非特异性和脱靶效应。 Principle 短发夹结构RNA（shRNA）是RNA干扰（RNAi）的一种方法，通过转染将质粒或病毒表达载体导入细胞群落。载体表达的短RNA序列可折叠成短的发夹结构，并经细胞RNAi机理处理。SureSilencing shRNA Plasmids使用质粒表达载体进行RNAi。 SureSilencing shRNA Plasmids有4种不同质粒规格。质粒含有潮霉素、新霉素或嘌呤霉素抗性基因或GFP。 含有潮霉素、新霉素或嘌呤霉素抗性基因的质粒可对稳转细胞进行筛选，非常适合研究细胞中基因敲减后的长期效应。含有GFP基因的质粒是siRNA另一种方法，可对瞬转细胞进行鉴定和追踪，非常适合研究短期基因敲减效应。可追踪或稳定表达shRNA使得RNAi可用于难转染的细胞。 与化学合成的siRNA不同，基于质粒的shRNA可提供RNAi的再生来源。可在实验室扩增出足够多的质粒，完成项目。SureSilencing shRNA Plasmids还包含完整的shRNA序列信息。 Procedure 首先将SureSilencing shRNA Plasmids转染到感受态E. coli细胞中。挑取克隆到大规模细菌培养基中，制备大规模、高品质的转染级质粒。基因特异性的shRNA质粒和阴性对照质粒都转染到目的细胞株的平行孔中，孵育24–48小时。 转染GFP SureSilencing shRNA Plasmid后，可使用荧光显微镜对细胞追踪和鉴定，或使用荧光激活细胞分选（FACS）或抗生素筛选对细胞进行富集。转染含有潮霉素、新霉素或嘌呤霉素的SureSilencing shRNA Plasmid后，细胞在含有合适抗生素的培养基中重铺，进而开始筛选稳定转染的细胞。敲除的程度可用T2 Profiler PCR Arrays或RT2 qPCR Primer Assays进行验证。 Applications SureSilencing shRNA Plasmids非常适合基因功能研究、去除蛋白活性和信号通路研究。 |
| 说明书 |
| |
| 供应商 | Qiagen |