多肽有着很多特性,关于一些特殊肽您需要的有关信息可与科瑞奥博公司的技术人员联系。当然首先建议您用少量肽来试验最适合的溶解方法,当多肽完全溶解后,才能加缓冲液(注意:应将多肽加入到适当溶剂中搅拌)。
一、冻干多肽的溶解
1、多肽溶解的主要问题是二级结构的形成。虽然疏水肽链二级结构的形成更明显,但除最短的肽链外,此现象产生在几乎所有肽链,与极性无关。所以,溶解多肽的第一个原则是使用无菌蒸馏水或去离子水,当然无氧水最好。多肽溶液可能遇到细菌降解,为防止此情况的发生,应溶解在无菌的蒸馏水中或用0.45或0.2孔径的滤膜过滤除菌。含有Cys、Met、Trp的多肽很容易氧化,应溶于无氧的水中,无氧水可通过注入惰性气体(氮、氦、氩)减压除气得到;
2、若多肽不溶于纯水,超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。注意:超声处理会引起溶液发热或多肽降解;
3、若多肽含有多个碱性氨基酸,使用(1-10%)的乙酸水溶液:对于疏水性强的多肽,应使用50%的乙酸;
4、若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用氨溶液(1-10%)或乙酸乙基吗啡或重碳酸盐等挥发性的碱性缓冲液溶解。pH值在层析前必须调整;
5、异丙醇和乙腈能溶解中等大小的多肽。若肽要上柱,有机溶剂的量必须很少否则将严重影响停留时间;
6、若多肽因含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳香链而高度疏水、或为中性肽时,DMF或DMSO等膜变性剂的使用,有利于多肽的溶解:
a.高浓度模变性剂通过破坏多肽的二级结构而助溶;
b.膜变性剂适于多肽分析液的制备,但可能会对其生物活性的研究工作造成干扰;
c.DMF是最佳变性剂(最高浓度可达30%),滴加至多肽溶解;
d.反相层析法时,DMF将与洗脱液前锋一起流出,根据入量的多少,峰值可能很高。大多数肽能在大量DMF流出后几分钟内流出,若肽链很小,洗脱太早,多肽的量将很低。
二、冻干多肽的保存
标有“冻干保存”说明的多肽应该保存在冰冻条件下,以-20℃以下最佳,其活性可保持多年。当使用干冻产品时,开盖前其容器应在装有新鲜干燥箱内升至室温。-20℃的产品,此过程需要一小时或更长,随保装而定。否则,当容器打开,水气进入导致凝缩而降低稳定性。一旦打开,应迅速称量完毕,立即封闭以免潮解,亲水肽更应注意。
三、溶解多肽的保存
多肽溶液比干粉的稳定性差很多,为了获得较好的效果,遵循以下原则:
1、分成小包装避免反复冻融。使用多少解冻多少;
2、溶于pH5-7无菌的缓冲液中,-20℃储存;
3、由于细菌能降解多肽,储存前应过滤细菌;
4、包含Cys、Met、Try、Glu、Asp的多肽易于氧化,因此应保存在无氧化剂的环境中。